ซึ่งในรอบดังกล่าว จะเป็นการพบกัน ของทีม จาก ไทยแลนด์ อเมเจอร์ ลีก 27 ทีม, มังกรฟ้า ลีก (ไทยลีก 3) 35 ทีม และ M-150 แชมเปี้ยนชิพ 16 ทีม

ผลจับสลากประกบคู่ทั้งหมด มีดังนี้

ขอนแก่นสามใบเถา เอฟซี – เกร็กคู สายไหม ยูไนเต็ด

เชียงราย เอฟซี – เชียงใหม่โค้ชชิ่ง ฟุตบอลคลับ

เอ็มเอช นครศรี เอฟซี – ไทยสปิริต เอฟซี

วังน้อย ซิตี้ – อุดรธานี เอฟซี

นครราชสีมา ยูไนเต็ด – นาวิกโยธิน ยูเรก้า เอฟซี

น่าน ซิตี้ – น้ำพอง ยูไนเต็ด

ชัยนาท ฮอร์นบิล – นครศรี ยูไนเต็ด

บิสสิต้า อโยธยา – ขอนแก่น เอฟซี

สโมสรฟุตบอลราชประชา – สตูล ยูไนเต็ด

เมืองเลย ยูไนเต็ด – กาญจนพัฒน์ เอฟซี

กำแพงเพชร เอฟซี – โดม เอฟซี

สายมิตร กบินทร์ ยูไนเต็ด – มหาสารคาม สามใบเถา เอฟซี

กาฬสินธุ์ ยูไนเต็ด – ราษีไศล ยูไนเต็ด

มาแชร์ ชัยภูมิ เอฟซี – คัสตอม ลาดกระบัง ยูไนเต็ด

นนทบุรี ซิตี้ – นครปฐม ยูไนเต็ด

พัทยาดอลฟินส์ ยูไนเต็ด – ฉะเชิงเทรา ไฮ-เทค เอฟซี

ปากช่อง เอสซีเค – ทวีวัฒนา สมุทรสาคร ยูไนเต็ด

ระยอง เอฟซี – สโมสรฟุตบอลราชนาวี

บางปะอิน อยุธยา เอฟซี – สงขลา เอฟซี

บ้านบึง เอฟซี – สุโขทัย เอฟซี

บางกอก เอฟซี – สุรินทร์ ซิตี้

สมุทรสงคราม เอฟซี – พราม แบงค็อก

พิจิตร ยูไนเต็ด – เมืองกาญจน์ ยูไนเต็ด

มหาวิทยาลัยเกษมบัณฑิต เอฟซี – อยุธยา ยูไนเต็ด

สระบุรี ยูไนเต็ด – พิษณุโลก เอฟซี

อุดร ยูไนเต็ด – ธีรชัยพาเลท สมุทรปราการ เอฟซี

ลำพูน วอริเออร์ – เกษตรศาสตร์ เอฟซี

ร้อยเอ็ด 2018 - กองเรือยุทธการ

สิงห์เหนือเชียงใหม่ – มหาวิทยาลัยปทุมธานี

สุรินทร์ดรา วายเอ็มเอ เอฟซี - นนทบุรี ยูไนเต็ด ส.บุญมีฤทธิ์

ส่วนทีมที่ได้รับสิทธิผ่านเข้ารอบต่อไปทันที มีดังนี้ : แพร่ ยูไนเต็ด, เอ็มเอชคอน สุราษฎร์ฯ ซิตี้, ชาติตระการ ซิตี้, ชัยนาท ยูไนเต็ด, สิงห์ระฆังทอง กาญจนบุรี เอฟซี, เชียงใหม่ เอฟซี, ปราจีนบุรี ซิตี้, อุทัยธานี เอฟซี, เคดีซี โซลูชั่น ฟุตบอลคลับ, ปลวกแดง ยูไนเต็ด, เดอะพีเอสแพลนเน็ตทีม, ขอนแก่นมอดินแดง ฟุตบอลคลับ, จตุรพักตรพิมาน สปอร์ต คลับ, เชียงราย ดราก้อน วีแบค เอฟซี, สี่แคว ซิตี้, สถานีตำรวจดอนเมือง, ลำปาง เอฟซี, เอ็มบีเอฟ อัมพวา เอฟซี

สำหรับการแข่งขัน ศึก ช้าง เอฟเอ คัพ 2021/22 ทีมที่ชนะเลิศการแข่งขัน จะได้รับสิทธิการผ่านไปเล่นเอเอฟซี แชมเปี้ยนส์ ลีก 2023 รอบแบ่งกลุ่ม ต่อไป